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關于液相色譜柱使用中的常見問題解答

更新時間:2024-09-30      瀏覽次數:620

Question 1、ShimNex HE SAX/SCX以及WP SAX/SCX色譜柱怎么活化?



1. 需要使用至少20倍柱體積的流動相平衡色譜柱。

2. 當流動相中緩沖鹽濃度較高時候,為了防止鹽在色譜柱或系統中析出,可使用20%的乙腈水溶液沖洗5倍以上柱體積作為緩沖,再過渡到流動相。

3. 因為SCX色譜柱鍵合的基團是磺酸基團,容易與醇類物質發生酯化反應,所以流動相應當避免醇的使用。

Question 2. ShimNex HE CN色譜柱的活化?


氰基柱既可以用在正相模式,又可以用于反相模式。考慮到色譜柱壽命,推薦使用過程中固定為其中一種模式。因色譜柱出廠時使用庚烷:乙酸乙酯=90:10進行質控,所以如需要使用反相模式,請先使用異丙醇等將柱內的溶劑進行充分置換后再用相應的流動相進行活化操作。

Question 3. C4 色譜柱怎么活化?


一般C4色譜柱的活化參照C18色譜柱,第一次使用色譜柱前,應先用20倍柱體積以上的甲醇/乙腈充分活化。為確保數據的質量,分析前應使用至少 10 倍柱體積的流動相平衡色譜柱。 若流動相中緩沖鹽濃度較高, 為了防止鹽在色譜柱或系統中析出,應先使用與流動相構成比例相同或有機相比例較低的水溶液沖洗至少 5 倍柱體積,再過渡到流動相。

Question 4. ShimNex HE SAX/SCX以及WP SAX/SCX怎么沖洗?


硅膠基質的離子交換色譜柱一般流失比較嚴重,壽命一般不是很好。所以色譜柱的清洗維護非常重要。色譜柱的污染可能會導致峰形的變化、峰分裂、肩峰、柱效的變化或背壓增加等問題。請參考以下方法進行清洗:

0.1%乙酸(5倍柱體積)>0.3M 磷酸鹽緩沖液,含0.1%乙胺四乙酸(pH7)(20倍柱體積)>0.1%乙酸(10倍柱體積)>乙腈(5倍柱體積)>異丙醇(20倍柱體積)>乙腈(5倍柱體積)

Question 5. 硅膠基質色譜柱的保存有什么注意事項?


 

Question 6. 氨基酸分析儀中,使用的Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱怎么活化?


在使用長期停止使用的色譜柱之前,用0.2M氫氧化鈉水溶液沖洗數小時。

Question7. 氨基酸分析儀中,使用的Shim-pack Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱臟了的時候怎么沖洗?


進行氨基酸分析后,首先可以選擇0.2M氫氧化鈉清洗鈉型色譜柱,用0.2M的氫氧化鋰清洗Li型色譜柱,此外還可以選擇酸性流動相和EDTA溶液進行清洗。

酸洗主要針對Li型以及Na型色譜柱,采用0.1M 硝酸沖洗數小時,然后使用0.2M氫氧化鈉清洗鈉型色譜柱或者0.2M的氫氧化鋰清洗Li型色譜柱幾個小時。EDTA沖洗,采用0.2M EDTA·2Na(乙二胺四乙酸二鈉鹽)水溶液以0.2m/min流過色譜柱1-2小時,用水沖洗,然后用0.2M氫氧化鋰沖洗Li型色譜柱一天,然后進行實驗。

如果色譜柱沖洗后沒有改善,說明色譜柱已損壞,需要更換新的色譜柱進行實驗。

Question 8. 使用的Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱怎么保存?


如果色譜柱超過半年不使用,建議使用以下流動相沖洗保存:使用0.2M的氫氧化鈉(氫氧化鋰)水溶液清洗色譜柱,用0.01%的辛酸的10%乙醇溶液置換色譜柱,最后將色譜柱保存在陰暗地方。

Question 9. Shim-pack Amino系列色譜柱有什么注意事項?


有機相比例不高于10%,避免高溫停泵(0.1-0.3 ml/min降至室溫后再停泵)。

Question 10. Shim-pack Amino Na型和Li型色譜柱有什么區別?


Shim-pack Amino-Na:大概可分析19個化合物,一針分析時間為90分鐘,分析速度快,化合物少;

Shim-pack Amino-Li:大概可分析38個化合物,一針分析時間為180分鐘,分析速度慢,化合物多。


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