HPLC柱前衍生和柱后衍生

1、為什么要衍生？
衍生化zui為主要的目的就是提高目的物的可檢測性。對于GC來講，多數(shù)是為了增強目的物揮發(fā)性或者改善目的物極性；對于HPLC來講多數(shù)是為了提高檢測器對目的物的相應。
2、衍生化分類：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在經(jīng)過分析柱前使分析物與衍生劑反應，反應產(chǎn)物在分析柱上實現(xiàn)分離，實際分離的是衍生產(chǎn)物，檢測的也是衍生產(chǎn)物；柱后衍生是分離物在分析柱中實現(xiàn)分離后，在衍生池內(nèi)與衍生劑反應，在柱子中分離的是目的物，在檢測器處檢測的衍生產(chǎn)物。
3、適用的化合物：生物酸/堿、胺類、抗生素（聚醚類抗生素多見）和氨基酸類。
4、衍生化要求？
1）衍生劑必須過量且穩(wěn)定；不過量反應不*，檢測不充分。不穩(wěn)定，重現(xiàn)性差。
2）衍生物、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物至少是好分離的。當然如果只能檢測到衍生產(chǎn)物。
3）衍生反快速*。反應慢，柱前衍生還可以，但柱后不行。因為流速固定，衍生池管路長度一定，留給衍生化的時間是一定的。柱前衍生可以在系統(tǒng)外等衍生完畢后進樣，但也是影響效率的。
5、兩種衍生比較
柱前衍生優(yōu)點是，對設備要求不高，可以手工衍生，而且對衍生時間要求相對寬泛。缺點是，引入了過多的物質(zhì)，如：衍生劑、衍生產(chǎn)物（當然這個是檢測需要的）和衍生副產(chǎn)物，對柱子有潛在的負面影響，另如采用手工衍生也會引入過多的認為因素。
柱后衍生優(yōu)點是，重現(xiàn)性好，認為因素少，引入物質(zhì)比較少。缺點是，可能有擴散問題，在柱子中分離結束后，就存在擴散，如果衍生慢（必然流速低）、管路長擴散問題就會比較嚴重，再有就是要求有一套外源的泵系統(tǒng)和一個檢測池，對于設備要求較高。